من من تهیه کننده کیت های تقویت کننده ایزوترمال RNA هستم و امروز می خواهم در مورد امکان استفاده از این کیت ها برای تقویت RNA تک سلولی گپ بزنم.
اول از همه ، بیایید بفهمیم تقویت RNA تک سلولی همه چیز در مورد چیست. توالی RNA تک سلولی (SCRNA - SEQ) به یک بازی تبدیل شده است - تغییر دهنده در تحقیقات بیولوژیکی. این امکان را به ما می دهد تا الگوهای بیان ژن سلولهای فردی را مطالعه کنیم ، که بسیار مهم است زیرا سلولهای یک بافت همه یکسان نیستند. ناهمگونی زیادی می تواند وجود داشته باشد ، و SCRNA - SEQ به ما کمک می کند تا در سطح تک سلولی به این اختلافات بپردازیم. اما در اینجا صید وجود دارد: مقدار RNA در یک سلول واحد بسیار ریز است. ما در مورد سطح پیکوگرام صحبت می کنیم. و برای اکثر تکنیک های تجزیه و تحلیل پایین دست ، ما به مقدار بسیار بیشتری RNA نیاز داریم. اینجاست که تقویت می شود.
بنابراین ، در مورد استفاده از کیت های تقویت ایزوترمال RNA ما برای این کار چگونه است؟ خوب ، بیایید به جوانب مثبت و منفی بپردازیم.
مزایا
1 سادگی
یکی از بزرگترین قدرت تقویت ایزوترمال سادگی آن است. بر خلاف PCR سنتی ، که به یک چرخه حرارتی نیاز دارد تا چرخه های دما مختلف را طی کند (دناتوراسیون ، بازپخت و پسوند) ، تقویت ایزوترمال در دمای ثابت اتفاق می افتد. این بدان معنی است که شما به یک چرخه حرارتی فانتزی و گران قیمت احتیاج ندارید. می توانید واکنش تقویت را در یک بلوک حرارتی ساده یا حتی یک حمام آب انجام دهید. برای محققانی که در حال تقویت RNA تک سلولی در بودجه یا در یک آزمایشگاه مجهز کمتر هستند ، این یک امتیاز عالی است.
2. سرعت
تقویت ایزوترمال معمولاً بسیار سریع است. این می تواند مقدار زیادی RNA تقویت شده را در یک دوره نسبتاً کوتاه ایجاد کند. وقتی با نمونه های تک سلولی سر و کار دارید ، زمان از ذات است. شما نمی خواهید ساعت ها صبر کنید تا تقویت شود. ماMIRA RNA کیت تقویت سریع ایزوترمال BASIC - IIبه گونه ای طراحی شده است که به شما نتایج سریع می دهد ، بنابراین می توانید بدون هدر دادن زمان زیاد به مرحله بعدی آزمایش خود بروید.
3. حساسیت
این کیت ها بسیار حساس هستند. آنها می توانند حتی رونوشتهای RNA فراوانی را در سلولهای منفرد تشخیص و تقویت کنند. در تجزیه و تحلیل تک سلولی ، اغلب رونوشت های نادر وجود دارد که برای درک عملکرد و توسعه سلول بسیار مهم هستند. کیت های تقویت ایزوترمال ما می توانند این نسخه های نادر را انتخاب کرده و آنها را تقویت کنند و به شما امکان می دهند نمای جامع تری از مشخصات بیان ژن در یک سلول واحد بدست آورید.
4. سازگاری
تقویت ایزوترمال با طیف گسترده ای از برنامه های پایین دست سازگار است. این که آیا شما می خواهید توالی RNA ، qPCR یا سایر روش های تجزیه و تحلیل را انجام دهید ، می توان از RNA تقویت شده از کیت های ما استفاده کرد. این انعطاف پذیری بسیار عالی است زیرا به شما امکان می دهد روش تجزیه و تحلیل را انتخاب کنید که متناسب با سوال تحقیق شما باشد.
معایب
1 تعصب
یکی از اشکالات اصلی هر روش تقویت ، تعصب است. تقویت ایزوترمال نیز از این قاعده مستثنی نیست. رونوشتهای مختلف RNA ممکن است با نرخ های مختلف تقویت شود ، که می تواند منجر به بازنمایی نادرست از جمعیت RNA اصلی در سلول واحد شود. این تعصب می تواند بر نتایج تجزیه و تحلیل پایین دست تأثیر بگذارد ، و تعیین دقیق سطح بیان ژن را دشوار می کند. با این حال ، تیم تحقیق و توسعه ما سخت تلاش کرده است تا این تعصب را در ما به حداقل برساندMIRA RNA کیت تست اسید نوکلئیک کیت تقویت سریع ایزوترمال ایزوترمالبشر ما شرایط واکنش و فرمولاسیون آنزیم را بهینه کرده ایم تا تقویت تا حد امکان بی طرفانه باشد.
2. خطر آلودگی
از آنجا که تقویت ایزوترمال می تواند مقدار زیادی از محصول تقویت شده را ایجاد کند ، خطر آلودگی بیشتری وجود دارد. حتی مقدار کمی از RNA یا DNA آلوده کننده می تواند تقویت و در نتایج شما نشان داده شود. این می تواند به مثبت کاذب و داده های نادرست منجر شود. برای کاهش این خطر ، پیروی از پروتکل های آزمایشگاهی سخت ، مانند استفاده از پیپت های اختصاصی ، کار در یک هود تمیز و استفاده از روش های ضد عفونی مناسب ، مهم است.
امکان سنجی در سناریوهای مختلف تحقیق
1. زیست شناسی رشد
در زیست شناسی رشد ، درک چگونگی تمایز و رشد سلول ها بسیار مهم است. تقویت RNA تک سلولی می تواند به محققان کمک کند تا ژن های کلیدی و مسیرهای سیگنالینگ درگیر در این فرآیندها را شناسایی کنند. کیت های تقویت ایزوترمال RNA ما در اینجا می توانند بسیار مفید باشند. به عنوان مثال ، هنگام مطالعه توسعه اولیه جنین ، تجزیه و تحلیل تک سلولی می تواند تغییرات بیان ژن را که با شروع تخصص سلول ها رخ می دهد ، نشان دهد. سادگی و سرعت کیت های ما به محققان این امکان را می دهد تا RNA را از این نمونه های تک سلولی گرانبها تقویت کنند و تجزیه و تحلیل داده ها را شروع کنند.
2. تحقیقات سرطان
سرطان یک بیماری پیچیده است و تجزیه و تحلیل RNA تک سلولی می تواند بینش در مورد ناهمگونی سلولهای تومور ارائه دهد. سلولهای مختلف درون یک تومور ممکن است پروفایل های بیان ژن مختلفی داشته باشند ، که می تواند بر رفتار آنها تأثیر بگذارد ، مانند متاستاز و مقاومت در برابر دارو. از کیت های ما می توان برای تقویت RNA از سلولهای سرطان منفرد استفاده کرد و محققان را قادر می سازد این اختلافات را در سطح مولکولی مطالعه کنند. حساسیت بالای کیت های ما می تواند رونوشت های نادر را که ممکن است مربوط به پیشرفت سرطان یا پاسخ به مواد مخدر باشد ، تشخیص دهد.
3. ایمونولوژی
در ایمونولوژی ، تجزیه و تحلیل RNA تک سلولی می تواند به درک عملکرد زیر مجموعه های مختلف سلول ایمنی کمک کند. به عنوان مثال ، سلولهای T می توانند زیرگروه های مختلفی داشته باشند که هر کدام یک الگوی بیان ژن منحصر به فرد دارند. کیت های تقویت ایزوترمال RNA ما می تواند برای تقویت RNA از سلولهای T تک استفاده شود و به محققان این امکان را می دهد تا تغییرات بیان ژن را که در طی یک پاسخ ایمنی رخ می دهد ، مطالعه کنند.
کنترل کیفیت
هنگام استفاده از کیت های تقویت ایزوترمال RNA ما برای تقویت RNA تک سلولی ، کنترل کیفیت ضروری است. شما همیشه باید یک کنترل منفی را برای بررسی آلودگی اجرا کنید. همچنین ، استفاده از سنبله - در کنترل های RNA ایده خوبی است. این توالی های RNA شناخته شده است که شما با غلظت شناخته شده به نمونه های تک سلولی خود اضافه می کنید. با مقایسه نتایج تقویت سنبله - در کنترل با RNA تک سلولی واقعی ، می توانید کارایی و تعصب واکنش تقویت را ارزیابی کنید.
علاوه بر این ، شما می توانید از الکتروفورز ژل یا الکتروفورز مویرگی برای بررسی توزیع اندازه RNA تقویت شده استفاده کنید. یک نتیجه تقویت خوب باید طیف نسبتاً گسترده ای از اندازه RNA را نشان دهد ، نشان می دهد که انواع رونوشت ها تقویت شده اند.
پایان
در نتیجه ، استفاده از کیت های تقویت ایزوترمال RNA ما برای تقویت RNA تک سلولی قطعاً امکان پذیر است. در حالی که برخی از چالش ها مانند تعصب و خطر آلودگی وجود دارد ، مزایای سادگی ، سرعت ، حساسیت و سازگاری آنها را برای بسیاری از سناریوهای تحقیق به گزینه خوبی تبدیل می کند. چه در یک آزمایشگاه تحقیقاتی اساسی باشید و چه در یک تحقیق بالینی ، کیت های ما می توانند به شما کمک کنند تا از نمونه های RNA تک سلولی خود نهایت استفاده را ببرید.
اگر علاقه مند به کسب اطلاعات بیشتر در مورد کیت های تقویت ایزوترمال RNA ما هستید یا در مورد استفاده از آنها برای تقویت RNA تک سلولی سؤال دارید ، احساس راحتی کنید. ما همیشه از گپ زدن و کمک به شما در نیازهای تحقیق خوشحالیم. و اگر آماده خرید هستید ، ما در اینجا هستیم تا روند تهیه را تسهیل کنیم. شما می توانید دامنه محصول ما ، از جملهکیت تقویت سریع ایزوترمال DNA MIRA BASIC، در وب سایت ما و سفر خود را در تجزیه و تحلیل RNA تک سلول شروع کنید.
منابع
- Tang ، F. ، Barbacioru ، C. ، Wang ، Y. ، Nordman ، E. ، Lee ، C. ، Xu ، N. ،… & Surani ، MA (2009). mRNA - SEQ کامل - تجزیه و تحلیل رونویسی از یک سلول واحد. روش های طبیعت ، 6 (5) ، 377 - 382.
- Van Dijk ، DF ، Nanys ، J. ، Guo ، G. ، Sharma ، R. ، Khodosevich ، K. ، Adonis ، X. ، ... & Van Oudenaarden ، A. (2018). ده سال توالی RNNA تک سلولی. ارتباطات طبیعت ، 9 (1) ، 1 -
- Chen ، F. ، & Macosko ، EZ (2019). فن آوری های توالی RNA تک سلول و خطوط لوله بیوانفورماتیک. پروتکل های طبیعت ، 14 (4) ، 1 202 - 1 226.