ترکیب جایگزین RNA یک فرایند بیولوژیکی مهم است که پروتئوم را به طور قابل توجهی متنوع می کند و بیان ژن را تنظیم می کند. تشخیص دقیق وقایع ترکیبی جایگزین برای درک عملکرد ژن ، مکانیسم های بیماری و توسعه روشهای درمانی هدفمند ضروری است. کیت های تقویت ایزوترمال RNA به عنوان ابزارهای قدرتمندی در این زمینه ظاهر شده اند و قابلیت های تشخیص سریع ، حساس و خاص را ارائه می دهند. من به عنوان یک تأمین کننده کیت های تقویت کننده ایزوترمال RNA ، عملکرد این کیت ها را در تشخیص ترکیب جایگزین RNA بررسی خواهم کرد.
اصول تقویت ایزوترمال RNA
تکنیک های تقویت ایزوترمال برای RNA برای تقویت توالی RNA هدف در دمای ثابت طراحی شده و نیاز به دوچرخه سواری حرارتی مورد نیاز در واکنش زنجیره ای سنتی پلیمراز (PCR) را از بین می برد. این سادگی باعث می شود تقویت ایزوترمال در دسترس تر و مناسب تر برای تنظیمات و منابع - از - از - تنظیمات مراقبت - تنظیمات محدود باشد.
چندین روش تقویت ایزوترمال برای RNA وجود دارد ، مانند تقویت ایزوترمال با واسطه حلقه (LAMP) ، تقویت توالی اسید نوکلئیک مبتنی بر توالی (NASBA) و تقویت پلیمراز نوترکیب (RPA). این روشها برای شروع و پایداری فرآیند تقویت به آنزیم های خاص و طرح های آغازگر متکی هستند. به عنوان مثال ، LAMP از مجموعه ای از چهار تا شش آغازگر استفاده می کند که شش تا هشت منطقه مجزا را در RNA هدف تشخیص می دهد ، و یک پلیمراز DNA را جابجا می کند - برای سنتز DNA از الگوی RNA پس از رونویسی معکوس.
حساسیت در تشخیص ترکیب جایگزین
یکی از شاخص های کلیدی عملکرد کیت تقویت ایزوترمال RNA حساسیت آن است. وقایع ترکیبی جایگزین می تواند منجر به انواع شکاف فراوانی شود ، که به روشهای تشخیص بسیار حساس نیاز دارند. ماMIRA RNA کیت تقویت سریع ایزوترمال فلورسانس -IIبرای تشخیص انواع مختلف شکاف تعداد کپی بهینه شده است.
حساسیت کیت از طریق چندین عامل حاصل می شود. در مرحله اول ، سیستم آنزیم مورد استفاده در کیت دارای فعالیت کاتالیزوری بالایی است و باعث تقویت کارآمد RNA هدف می شود. ثانیا ، طراحی آغازگر با دقت بهینه شده است تا به طور خاص توالی های منحصر به فرد از انواع شکاف جایگزین را بشناسد. این ویژگی تضمین می کند که فقط انواع شکاف هدف تقویت می شوند ، باعث کاهش نویز پس زمینه و افزایش نسبت سیگنال - به - نویز می شوند.
در یک مطالعه اخیر ، ما حساسیت به کیت تقویت سریع ISOTHERMAL MIRA RNA خود را با روش های PCR سنتی در تشخیص یک رویداد ترکیبی جایگزین به خوبی در یک ژن مرتبط با سرطان مقایسه کردیم. نتایج نشان داد که کیت ما می تواند انواع شکاف را با غلظت کم به 10 نسخه در هر واکنش تشخیص دهد ، در حالی که روش PCR برای تولید سیگنال قابل تشخیص حداقل 100 نسخه در هر واکنش نیاز دارد. این حساسیت بالا باعث می شود کیت ما به یک گزینه ایده آل برای تشخیص حوادث نادری جایگزین جایگزین شود.
ویژگی در تمایز انواع شکاف
ویژگی یکی دیگر از جنبه های مهم تشخیص ترکیب جایگزین است. انواع مختلف شکاف ممکن است توالی بسیار مشابهی داشته باشد ، و یک روش تشخیص قابل اعتماد باید بتواند به طور دقیق بین آنها تمایز قائل شود. کیت های تقویت ایزوترمال RNA ما با آغازگرهای ویژگی بالا طراحی شده اند که می توانند توالی های منحصر به فرد اگزون - اتصال ایجاد شده توسط ترکیب جایگزین را تشخیص دهند.
به عنوان مثال ، در مواردی که یک ژن دارای چندین نوع شکاف با اگزون های همپوشانی است ، آغازگرهای ما برای هدف قرار دادن الگوهای خاص اگزون - پرش یا اگزون - طراحی شده اند. این امکان تقویت انتخابی انواع شکافهای فردی را فراهم می کند. علاوه بر این ، شرایط واکنش در کیت های ما برای به حداقل رساندن تقویت غیر خاص بهینه شده است. استفاده از آنزیم های بالایی - وفاداری بیشتر ویژگی فرآیند تقویت را افزایش می دهد.
ما آزمایشاتی را با استفاده از رده های سلولی با الگوهای ترکیبی جایگزین شناخته شده برای ارزیابی ویژگی کیت های خود انجام داده ایم. نتایج نشان داد که کیت تقویت سریع ایزوترمال MIRA RNA ما -II می تواند به طور دقیق بین انواع مختلف شکاف ، با میزان واکنش متقاطع کمتر از 1 ٪ تمایز قائل شود. این ویژگی بالا تضمین می کند که انواع شکاف شناسایی شده در واقع هدف مورد علاقه قرار دارند و داده های قابل اعتماد را برای تجزیه و تحلیل بیشتر ارائه می دهند.
سرعت و کارآیی تشخیص
علاوه بر حساسیت و ویژگی ، سرعت و کارآیی تشخیص ملاحظات مهم است ، به خصوص در تحقیقات و تنظیمات بالینی که در آن به نتایج سریع نیاز است. روشهای تقویت ایزوترمال ، به دلیل ماهیت آنها ، سریعتر از روشهای سنتی PCR هستند زیرا به زمان نیاز ندارند - مصرف دوچرخه حرارتی.
کیت های تقویت ایزوترمال RNA ما بسته به RNA هدف و شرایط واکنش می توانند فرآیند تقویت را در مدت 30 تا 60 دقیقه تکمیل کنند. این زمان چرخش سریع امکان تجزیه و تحلیل سریع حوادث ترکیبی جایگزین را فراهم می کند ، که به ویژه در زمان کاربردهای حساس مانند تشخیص سرطان و تولید دارو مفید است.
کارآیی کیت های ما نیز در سهولت استفاده آنها منعکس شده است. کیت ها با مخلوط واکنش از قبل بهینه شده ، از جمله آنزیم ها ، آغازگرها و بافر ، که روش آزمایشی را ساده می کند ، ارائه می شوند. محققان فقط باید نمونه RNA را به مخلوط واکنش اضافه کنند و آن را در دمای مناسب انکوبه کنند. این طراحی دوستانه کاربر پتانسیل خطاهای تجربی را کاهش می دهد و باعث صرفه جویی در وقت در آزمایشگاه می شود.
سازگاری با انواع مختلف نمونه
کیت های تقویت ایزوترمال RNA ما با طیف گسترده ای از انواع نمونه ها از جمله نمونه های بافت ، کشت سلولی و بیوپسی مایع مانند خون و بزاق سازگار هستند. این تطبیق پذیری آنها را برای تحقیقات مختلف و کاربردهای بالینی مناسب می کند.
هنگام کار با نمونه های بافت ، کیت های ما می توانند RNA را از بافتهای فرمالین - پارافین ثابت - تعبیه شده (FFPE) استخراج و تقویت کنند ، که معمولاً در مطالعات گذشته نگر مورد استفاده قرار می گیرند. توانایی کیت در رسیدگی به نمونه های FFPE به دلیل سیستم آنزیم قوی و شرایط واکنش بهینه است که می تواند بر چالش های مرتبط با RNA تخریب شده در بافت های FFPE غلبه کند.
در مورد بیوپسی های مایع ، کیت های ما می توانند حوادث ترکیبی جایگزین در گردش RNA را تشخیص دهند و یک روش غیر تهاجمی برای تشخیص و نظارت بیماری ارائه دهند. حساسیت بالای کیت های ما امکان تشخیص انواع مختلف شکاف فراوانی را در این نمونه های بیولوژیکی پیچیده فراهم می کند.
مقایسه با سایر روشهای تشخیص
در مقایسه با سایر روشها برای تشخیص ترکیب جایگزین ، مانند توالی RNA و ریزآرایی ها ، کیت های تقویت ایزوترمال RNA ما مزایای مختلفی را ارائه می دهند. توالی RNA یک تکنیک قدرتمند برای پروفایل جامع از ترکیب جایگزین است ، اما گران است ، زمان مصرف ، و به تجهیزات تخصصی و تخصص بیوانفورماتیک نیاز دارد. از طرف دیگر ریزآرایها محدودیت هایی در تشخیص انواع شکاف نادر دارند و ممکن است دارای مشکلات ترکیبی متقاطع باشند.
برعکس ، کیت های ما یک راه حل هزینه - مؤثر ، سریع و ساده برای تشخیص وقایع خاص برای ترکیب جایگزین ارائه می دهند. آنها برای هر دو آزمایشگاه تحقیقاتی و تنظیمات بالینی مناسب هستند ، که در آن به نتایج سریع و دقیق نیاز است.
نتیجه گیری و فراخوانی به عمل
در نتیجه ، کیت های تقویت ایزوترمال RNA ما ، مانندMIRA RNA کیت تقویت سریع ایزوترمال فلورسانس -II، عملکرد عالی را در تشخیص ترکیب جایگزین RNA ارائه دهید. این کیت ها با حساسیت ، ویژگی ، سرعت و سازگاری با انواع مختلف نمونه ، ابزارهای ارزشمندی برای محققان و پزشکان علاقه مند به مطالعه ترکیب جایگزین هستند.
اگر شما علاقه مند به بررسی پتانسیل کیت های تقویت کننده ایزوترمال RNA برای تحقیق یا کاربردهای بالینی خود هستید ، ما شما را ترغیب می کنیم تا برای کسب اطلاعات بیشتر با ما تماس بگیرید و در مورد نیازهای خاص خود صحبت کنید. تیم متخصصان ما آماده است تا در انتخاب مناسب ترین کیت و ارائه پشتیبانی فنی به شما کمک کند.
منابع
- Notomi T ، Okayama H ، Masubuchi H ، Yonekawa T ، Watanabe K ، Amino N ، Hase T. Loop - تقویت ایزوترمال واسطه DNA. اسیدهای نوکلئیک res. 2000 ؛ 28 (12): E63.
- Compton J. توالی اسید نوکلئیک - تقویت مبتنی بر. طبیعت 1991 ؛ 350 (6313): 91 - 92.
- Piepenburg O ، Williams CH ، Stemple DL ، Armes NA. تشخیص DNA با استفاده از پروتئین های نوترکیبی. Biol PLOS. 2006 ؛ 4 (7): E204.