Staphylococcus haemolyticus یک باکتری منفی گرم- منفی است که در بیمارستان ها بسیار شایع است. در سالهای اخیر ، عفونت های به دست آمده در بیمارستان به دلیل خطر بالاتر مورد توجه فزاینده قرار گرفته اند. استافیلوکوک Haemolyticus می تواند باعث عفونت های پوستی ، مننژیت ، پریتونیت و حتی سپسیس شود. تأخیر در تشخیص بالینی می تواند منجر به بدتر شدن وضعیت سلامت شود ، بنابراین تشخیص سریع S. haemolyticus برای درمان دقیق مهم است.
تیم تحقیقاتی معلمان جی توو از گروه آزمایشگاه مرکزی بیمارستان دوم مردم لیانونگانگ ، چین مقاله ای را منتشر کرد "تشخیص سریع و بینایی استافیلوکوکوس haemolyticus در نمونه های بالینی با MIRA-LFS" در ژورنال "Analytica Chimica Acta" ، با تأثیر 6.2.
1. بررسی اجمالی research
در این مطالعه ، یک روش MIRA-LFS بر اساس ژن MVAA برای تشخیص استافیلوکوک Haemolyticus ایجاد شد. فناوری تقویت اسید نوکلئیک سریع ایزوترمال چند آنزیمی MIRA با LFS تست جریان جانبی برای دستیابی به تشخیص سریع پاتوژن ترکیب شد.
این آزمایش با 37 درجه انجام شد و نتایج را می توان طی 9 دقیقه تشخیص داد. حساسیت تشخیص 0. 147CFU/واکنش بود.
روش تشخیص MIRA-LFS برای تشخیص نقطه ثابت استافیلوکوک Hemolyticus در نمونه های بالینی مناسب است ، و با تحقق روش POCT برای شناسایی استافیلوکوکوس hemolyticus ، که برای تشخیص سریع بیماری و درمان در مناطقی که دارای خدمات پزشکی نیستند ، از ارزش زیادی برخوردار است.
تیم تحقیق از MIRA-LFS ، qPCR و روش های سنتی کشت باکتریایی برای تجزیه و تحلیل 95 نمونه بالینی تصادفی استفاده کرده و کاربرد بالینی را تأیید کردند.
2. روش های جستجوی
نمودار شماتیک تشخیص MIRA-LFS در بالا نشان داده شده است.
در این تحقیق از کیت تقویت سریع ایزوترمال DNA Biotech آمپول (نوع نوار تست طلای کلوئیدی) و نوارهای آزمایش اسید نوکلئیک استفاده شده است.
طول آغازگر ژن MVAA {{0} nucleotides است ، و طول محصول تقویت کننده 100-350 bp است. در مجموع 6 جفت آغازگر نامزد طراحی شد. تجزیه و تحلیل MIRA با استفاده از gDNA از سویه های استاندارد استافیلوکوکوس همولیتیکوس انجام شد ، آغازگرهای کاندیدای مورد بررسی قرار گرفتند و محصولات تقویت با استفاده از 2 ٪ الکتروفورز ژل آگارز نمایش داده شد.
سپس کاوشگر را بر اساس توالی آغازگر رو به جلو (گسترش 16 جفت باز به عقب) طراحی کنید. انتهای 5 پروب با FITC برچسب گذاری شد و انتهای 3 با مسدود شدن C3 برچسب گذاری شد. برای جایگزینی 31 نوکلئوتید در کاوشگر از THF استفاده کنید. THF از انتهای 5 و 15 جفت باز از انتهای 3 است. انتهای 5 آغازگر معکوس انتخاب شده با بیوتین برچسب گذاری شده است.
علاوه بر این ، تیم تحقیقاتی شرایط واکنش برای تشخیص MIRA-LFS استافیلوکوک Hemolyticus را بهینه کرد. در فواصل 2 دقیقه از 4 تا 12 دقیقه در 37 درجه تست کنید. نتایج در زمان واکنش 8min نمایش داده می شود و خط آزمایش به وضوح قابل مشاهده است. علاوه بر این ، آزمایشات در فواصل 5 درجه از درجه {7}} انجام می شود. درجه {8}} درجه مناسب ترین دما برای تشخیص MIRA-LFS است. بنابراین ، زمان واکنش بهینه و دمای روش MIRA-LFS برای استافیلوکوک Haemolyticus به ترتیب 8 دقیقه و 37 درجه است. همراه با نتیجه نهایی که توسط LFS در طی 1 دقیقه مشاهده می شود ، زمان تشخیص کل 9 دقیقه است.
3. نتایج تجربی
تأیید حساسیت
روش MIRA-LFS بر روی غلظت های مختلف DNA ژنومی (GDNA) به دست آمده از کشتهای استافیلوکوکوس Haemolyticus به دست آمده (1 {3 {3}^{{2}^0 CFU/ml) انجام شد.
تجزیه و تحلیل رگرسیون واحد احتمالی نشان داد که LOD 95 ٪ تعیین شده توسط روش MIRA-LFS 0. 147 CFU/واکنش بود.
تأیید ویژگی
با تجزیه و تحلیل 18 سویه میکروبی بیماری زا مشترک و 15 سویه بالینی استافیلوکوک Haemolyticus ، انتخاب تشخیص MIRA-LFS از استافیلوکوک Haemolyticus تعیین شد. نتایج نشان داد که آزمایش MIRA-LFS برای 18 باکتری بیماری زا دیگر منفی و برای 15 نمونه بالینی تأیید شده استافیلوکوک Haemolyticus مثبت بود.
تشخیص MIRA-LFS بسیار انتخابی و مناسب برای غربالگری استافیلوکوک Hemolyticus است.
آزمایش نمونه واقعی
بیمارستان دوم لیانیونگانگ به طور تصادفی 95 نمونه از جمله 35 نمونه پوست و بافت نرم ، 16 نمونه ادرار ، 14 نمونه خلط و 30 نمونه خون را جمع آوری کرد.
نتایج نشان داد که روش تشخیص 100 ٪ با روش qPCR سازگار است. علاوه بر این ، در مقایسه با استاندارد طلا (GB/T4789. {2}}) ، حساسیت و ویژگی روش تشخیص MIRA-LFS برای شناسایی عفونت استافیلوکوکوس همولیتیکوس به ترتیب 100 ٪ و 98.73 ٪ بود. این نتایج بیشتر امکان سنجی فنی این روش را در تشخیص استافیلوکوک Hemolyticus در نمونه های بالینی تأیید کرد.
از روش MIRA-LFS برای تشخیص سریع POCT استافیلوکوک Hemolyticus استفاده می شود. این کارآمد ، دقیق ، ساده و کم هزینه است و به تصمیم گیری سریع و درمانی کمک می کند.
در مورد فناوری MIRA بیاموزید
تکنولوژی تقویت اسید نوکلئیک سریع ایزوترمال آمپ-آینده ، اسیدهای نوکلئیک را در دمای ثابت 39 درجه {3}} درجه تقویت می کند ، با زمان واکنش فقط {4} دقیقه. علاوه بر این ، شرایط سخت آزمایشگاهی مورد نیاز نیست و سناریوهای کاربردی متنوع هستند: ادارات آزمایشگاه بیمارستان عمومی ، مراقبت های اولیه ، آزمایش خانه ، زمینه ها و غیره.
فرم های محصول معرف متنوع هستند: پودر خشک شده با یخ ، میکروسفرهای خشک شده با یخ و غیره. نتایج نمایش متنوع است: الکتروفورز ژل ، منحنی فلورسانس ، نوارهای تست طلای کلوئیدی و غیره. این معرف دارای عملکرد پایدار است ، به راحتی کار می کند و برای ذخیره و حمل و نقل مناسب است.
با استفاده از MIRA به عنوان فناوری پلت فرم اصلی ، این مجموعه یک سری محصولات پشتیبانی مانند "فناوری انتشار اسید نوکلئیک فوق العاده سریع" ، "ردیاب فلورسانس ایزوترمال دو کانال" ، "سیستم تشخیص کاملاً خودکار بسته" ، "دستگاه تشخیص اسید نوکلئیک خودآزمایی" و غیره را ایجاد کرده است.