Staphylococcus haemolyticus یک باکتری منفی گرم- منفی است که در بیمارستان ها بسیار شایع است. در سالهای اخیر ، به دلیل خطر بالای عفونت های ناشی از بیمارستان ، نگرانی های فزاینده ای وجود داشته است. استافیلوکوک Haemolyticus می تواند باعث عفونت های پوستی ، مننژیت ، پریتونیت و حتی سپسیس شود. تأخیر در تشخیص بالینی می تواند منجر به وخامت در شرایط بهداشتی شود ، بنابراین تشخیص سریع استافیلوکوک Haemolyticus برای درمان دقیق مهم است.
گروه تحقیقاتی پروفسور جی توو از گروه آزمایشگاه مرکزی لیانیونگانگ بیمارستان دوم مردم مقاله "تشخیص سریع و بینایی استافیلوکوکوس haemolyticus در نمونه های بالینی با MIRA-LFS" در ژورنال "Analytica Chimica Acta" ، با ضریب تأثیر 6.2 منتشر کرد.
نمای کلی از مطالعه
در این مطالعه ، گروه پروفسور جی توو روشی را برای تشخیص staphylolyticus haemolyticus توسط MIRA-LFS بر اساس ژن MVAA ایجاد کرد و از فن آوری تکنولوژی تقویت کننده اسید نوکلئیک دمای چند آنزیمی MIRA ترکیب شده با LFS تست جریان جانبی برای دستیابی سریع به تشخیص پاتوژن استفاده کرد. این آزمایش در 37 درجه انجام شد و نتایج در طی 9 دقیقه با حساسیت تشخیص {4}}}. 147 CFU/واکنش تشخیص داده شد. روش تشخیص MIRA-LFS برای تشخیص نقطه ثابت استافیلوکوک Haemolyticus در نمونه های بالینی مناسب است و روش شناسایی استافیلوکوک Haemolyticus توسط POCT را تحقق می بخشد ، که برای تشخیص سریع و درمان بیماریها در مناطق تحت نظارت بسیار مهم است. این گروه تحقیقاتی از MIRA-LFS ، qPCR و روش های سنتی کشت باکتریایی برای تجزیه و تحلیل 95 نمونه بالینی تصادفی استفاده کرده و کاربرد بالینی را تأیید کردند.
روشهای تحقیق
یک نمودار شماتیک از آزمایش MIRA-LFS در بالا نشان داده شده است. در این مطالعه از کیت تقویت سریع دمای DNA Biotech AmpFuture (نوع نوار تست طلای کلوئیدی) و نوار آزمایش اسید نوکلئیک استفاده شد.
طول آغازگر ژن MVAA {{0} nucleotides بود ، و طول محصول تقویت کننده {1}} bp بود و در مجموع 6 جفت آغازگر کاندیدای طراحی شد. GDNA از سویه های استافیلوکوک استاندارد استافیلولیتیک استاندارد برای تجزیه و تحلیل MIRA استفاده شد ، آغازگرهای کاندیدای مورد بررسی قرار گرفتند ، و محصولات تقویت شده توسط 2 ٪ الکتروفورز ژل آگارز مشاهده شد.
(محصولات تقویت شده با استفاده از الکتروفورز ژل آگارز نمایش داده می شوند)
سپس کاوشگر مطابق توالی آغازگر رو به جلو (16 جفت باز به عقب) طراحی شده است. انتهای 5 پروب با FITC برچسب گذاری شده است و انتهای 3 "C3 است. nucleotide موقعیت {4}} در پروب با THF در فاصله 30 جفت باز از انتهای 5 و 15 جفت باز از انتهای 3 جایگزین می شود. انتهای 5 آغازگر معکوس انتخاب شده با بیوتین برچسب گذاری شده است.
.
علاوه بر این ، شرایط واکنش برای تشخیص MIRA-LFS توسط استافیلوکوکوس haemolyticus بهینه شد. تست ها در 37 درجه از {2}} دقیقه در فواصل 2 دقیقه انجام می شود. نتایج در زمان واکنش 8 دقیقه نشان داده شده است و خط آزمایش به وضوح قابل مشاهده است. علاوه بر این ، آزمون از درجه 5}}} در فواصل 5 درجه انجام می شود. درجه {7}} درجه مناسب ترین دما برای تشخیص MIRA-LFS است. بنابراین ، زمان واکنش بهینه و دمای روش MIRA-LFS برای استافیلوکوک Haemolyticus به ترتیب 8 دقیقه و 37 درجه بود. همراه با این واقعیت که نتیجه نهایی توسط LFS در مدت 1 دقیقه مشاهده می شود ، زمان تشخیص کل 9 دقیقه است.
(بهینه سازی زمان و دما واکنش)
نتایج تجربی
1. تأیید حساسیت
غلظت های مختلف DNA ژنومی (gDNA) به دست آمده از رقیق سریال کشت استافیلوکوک Haemolytica (1 {{2}^{{1}^0 CFU/ml) برای mira-lfs مورد آزمایش قرار گرفت.
(سیگنال مثبت در غلظت های مختلف)
تجزیه و تحلیل رگرسیون واحد احتمالی نشان داد که LOD 95 ٪ تعیین شده توسط روش MIRA-LFS 0. 147CFU/واکنش بود.
(حد محاسبه تشخیص)
2. اعتبار سنجی ویژگی
انتخاب تشخیص MIRA-LFS با تجزیه و تحلیل 18 سویه از میکروارگانیسم های بیماری زا مشترک و 15 سویه از استافیلوکوک بالینی Haemolyticus تعیین شد. نتایج نشان داد که آزمایش MIRA-LFS برای هر 18 باکتری بیماری زا دیگر منفی بود و برای 15 نمونه بالینی تأیید شده استافیلوکوک Haemolyticus مثبت بود.
(8 سویه باکتریهای بیماری زا استاندارد و 15 سویه از استرپتوکوک همولیتیک بالینی به ترتیب مورد آزمایش قرار گرفتند)
روش MIRA-LFS دارای انتخاب بالایی است و برای غربالگری استافیلوکوک Haemolyticus مناسب است.
3. آزمایش نمونه واقعی
در مجموع 95 نمونه به طور تصادفی از بیمارستان افراد دوم لیانونگانگ ، از جمله 35 نمونه از پوست و بافت نرم ، 16 نمونه ادرار ، 14 نمونه از خلط و 30 نمونه خون جمع آوری شد.
(95 نمونه بالینی با روش های مختلف مورد آزمایش قرار گرفتند)
نتایج نشان داد که روش تشخیص 100 ٪ با روش qPCR سازگار است. علاوه بر این ، در مقایسه با استاندارد طلا (GB/T4789. 11-2003) ، حساسیت و ویژگی روش MIRA-LFS برای شناسایی عفونت استافیلوکوک Haemolytica به ترتیب 100 ٪ و 98.73 ٪ بود. این نتایج بیشتر امکان سنجی فنی روش در تشخیص استافیلوکوک Haemolyticus در نمونه های بالینی را تأیید می کند.
از روش MIRA-LFS برای تشخیص سریع استافیلوکوک Haemolyticus توسط POCT استفاده می شود ، که کارآمد ، دقیق ، ساده و مقرون به صرفه است که برای تشخیص سریع و تصمیمات درمانی مفید است.