در زمینه تشخیص مولکولی، واکنش زنجیره ای پلیمراز (PCR) به مدت طولانی به عنوان استاندارد طلایی برای تشخیص اسید نوکلئیک در نظر گرفته شده است. در سالهای اخیر، فناوریهای تقویت همدما، که با تقویت پلیمراز ریکامبیناز (RPA) نشان داده میشوند، به دلیل سرعت، سادگی و مناسب بودن برای آزمایش در سایت، توجه فزایندهای را به خود جلب کردهاند.
اگرچه PCR و RPA هر دو روشهای تقویت اسید نوکلئیک هستند، اما از نظر اصول کار، الزامات تجهیزات و سناریوهای کاربرد تفاوت قابل توجهی دارند و هر فناوری را برای نیازهای تشخیصی مختلف مناسب میسازد.
1. اصول اصلی: چرخه حرارتی در مقابل تقویت دمای ثابت{2}}
PCR یک فرآیند بیوشیمیایی است که قادر به تکثیر یک مولکول DNA به میلیونها نسخه در مدت زمان کوتاهی است. واکنش متکی بر چرخه حرارتی مکرر است و از سه مرحله اصلی تشکیل شده است:
1. دناتوراسیون (90-95 درجه) - DNA دو رشته ای به رشته های منفرد جدا می شود.
2. بازپخت (55-65 درجه) - پرایمرها به دنباله های هدف متصل می شوند.
3. گسترش (72 درجه) - DNA پلیمراز رشته های DNA جدید را سنتز می کند.
از طریق این چرخههای{0}کنترل شده دما، DNA هدف به صورت تصاعدی با دقت بالا تقویت میشود. با این حال، PCR به ابزارهای چرخه حرارتی پیچیده نیاز دارد و معمولاً 1 تا 2 ساعت طول می کشد تا تکمیل شود.
در مقابل، RPA در دمای ثابت 37-42 درجه عمل میکند و تقویت سریع اسید نوکلئیک را بدون چرخه حرارتی ممکن میسازد. این فناوری بر عملکرد هماهنگ پروتئینهای رکامبیناز، تکرشتهای-DNA{4}}پروتئینهای اتصال{4}}و رشته-جابجایی DNA پلیمراز برای دستیابی به تقویت هدف بسیار خاص در شرایط همدما متکی است.
DNA پلیمراز مورد استفاده در RPA دارای فعالیت جابجایی رشته است اما فاقد فعالیت اگزونوکلئاز 5'→3' است. در طول تقویت، پرایمرهای بیرونی در امتداد رشته الگو گسترش می یابند. هنگامی که آنها با نواحی{4}دو رشته ای سنتز شده از آغازگرهای داخلی مواجه می شوند، پلیمراز نمی تواند رشته پایین دستی را تخریب کند و در عوض آن را جابجا می کند و محصولات تقویت کننده جدیدی تولید می کند.
کل واکنش در دمای ثابت تکمیل میشود و نیاز به ابزار دقیق را از بین میبرد و آزمایشهای مبتنی بر مراقبتهای واقعی و میدانی را امکانپذیر میسازد. با ترکیب ترانس کریپتاز معکوس، RPA می تواند برای تشخیص هدف RNA نیز اعمال شود.
نتایج تقویت را میتوان با استفاده از قالبهای بازخوانی متعدد، از جمله تشخیص نقطه پایانی،-پایش فلورسانس در زمان واقعی، سنجش جریان جانبی، تجزیه و تحلیل کرد و میتواند با سیستمهای CRISPR-Cas، میکروسیالها یا توالییابی نسل بعدی (NGS) برای توسعه سنجش پیشرفته ادغام شود.
سناریوهای کاربردی: دقت آزمایشگاهی در مقابل تست سریع در سایت-
PCR به یکی از با ارزش ترین فناوری های تشخیص مولکولی تبدیل شده است و استاندارد طلایی برای آزمایش اسید نوکلئیک باقی مانده است.
به لطف دقت،{0}}هزینه و مقیاسپذیری بالا، PCR به طور گسترده در تشخیص بالینی، آزمایشگاههای متمرکز، مؤسسات تحقیقاتی و برنامههای غربالگری در مقیاس بزرگ، جایی که زیرساختها و پرسنل آموزش دیده به راحتی در دسترس هستند، استفاده میشود.
از سوی دیگر، RPA مزایای واضحی را در تشخیص سریع-در سایت ارائه میکند. با تقویت در کمتر از 20 دقیقه، حداقل نیاز به تجهیزات و عملکرد ساده، RPA ایده آل است.
- مراقبت های بهداشتی اولیه و تنظیمات اورژانس
- گمرک و بازرسی مرزی
- غربالگری میدانی بیماریهای حیوانی و گیاهی
- تست ایمنی محیطی و مواد غذایی
هنگامی که با دستگاه های قابل حمل و نوارهای جریان جانبی ترکیب می شود، RPA آزمایش مولکولی سریع و قابل اعتماد را در خارج از آزمایشگاه های سنتی امکان پذیر می کند.
MIRA (تقویت سریع ایزوترمال چند آنزیمی)فناوری تقویت همدما اختصاصی Amp Future است. این به همان خانواده فنی RPA تعلق دارد و از مکانیسم های نوترکیبی و ترمیم DNA طبیعی الهام گرفته شده است و از چندین آنزیم عملکردی برای دستیابی به تقویت سریع اسید نوکلئیک در دمای ثابت استفاده می کند.
MIRA از یک سیستم هماهنگ متشکل از پنج آنزیم کلیدی، از جمله هلیکاز، ریکامبیناز، پروتئین اتصال تک رشتهای-DNA-و DNA پلیمراز استفاده میکند تا بتواند:
- محدوده دمای عملیاتی گسترده: 25-45 درجه
- تقویت سریع: در عرض 20 دقیقه نتیجه می گیرد
- حساسیت و ویژگی بالا
- افزایش ایمنی و کاهش خطر آلودگی
MIRA یک فناوری تقویت اسید نوکلئیک است که بهطور خاص برای آزمایشهای واقعی در-سایت و نقطه--مراقبت طراحی شده است.
Amp Future بر اساس پلت فرم MIRA مجموعه ای جامع از محصولات را برای POCT مولکولی سریع ایجاد کرده است، از جمله:
عامل انتشار سریع اسید نوکلئیک:
اسید نوکلئیک قابل تقویت ظرف 5 دقیقه در دمای اتاق به دست می آید. مهار کم، امکان بارگیری کامل نمونه تا 50 میکرولیتر را فراهم می کند. حمل و نقل و ذخیره سازی در دمای اتاق، بدون نیاز به محافظت از نور.
معرف تقویت کننده اسید نوکلئیک ایزوترمال:
تقویت در 5-20 دقیقه، سریع و کارآمد انجام شد. اشکال مختلف معرف (پودر لیوفیلیزه، میکروسفرهای لیوفیلیزه و غیره)؛ روش های مختلف ارائه نتایج (الکتروفورز، فلورسانس، نوار تست).
دستگاه های کوچک قابل حمل:
آشکارسازهای دیجیتالی همدما، ابزارهای تست جیبی{0}}، به راحتی در یک دست، مجهز به پاوربانک، شما را از محدودیت های آزمایشگاهی رها می کند و آزمایش دقیق اسید نوکلئیک را به میدان می آورد.
نوار تست تک/چند:
بهینه شده بر اساس روش MIRA برای سازگاری بهتر. همراه با فناوری MIRA، راحتی را برجسته می کند.
آنالایزر تمام اتوماتیک تقویت اسید نوکلئیک:
برای تشخیص کاملاً خودکار فقط به یک عملیات بارگیری نمونه نیاز دارد. محدودیت تشخیص به تک نسخه. تقویت همدما و دربندی خودکار خطر آلودگی را کاهش می دهد.
در{0}}بسته آزمایش سریع سایت:
در -تست-محلی، در هر زمان، هر مکان، همه در یک بسته. تست را در 30 دقیقه کامل می کند، دقیق و حساس.
برای اطلاعات بیشتر درباره محصول یا راه حل ها، لطفا با ما تماس بگیرید.